研究设计

观察人群：发现队列discoverycohort（来自瑞典，名SLE患者），复制队列replicationcohort（来自挪威和丹麦，名SLE患者），健康对照（包括吸烟或不吸烟）。

观察项目：一般临床资料，是否吸烟（吸烟=当前或既往吸烟，从不吸烟），系统性红斑狼疮ACR分类诊断标准，狼疮肾炎分类（I-V,ESRD），心血管事件（MI,ICVD缺血性脑血管病,VTE,临床APS,抗磷脂抗体滴度）。

筛选目标基因：本文共研究4个HLA和56个非HLASNPs与心肌梗死的关系。选择已知与SLE相关的SNPs，使用免疫芯片对发现队列进行基因分型；复制队列使用MassARRAY系统上的自定义分析对三个单核苷酸变体进行基因分型；健康对照组分析IL-12诱导的信号传导因子和转录激活因子4(pSTAT4)的磷酸化。

统计分析

吸烟与长病程和年龄有关，将上述变量纳入协变量。分析SNPs时，首先分别筛选出与MI正相关的变量，其次把有统计学意义的变量纳入logistic回归模型进行分析。对两个数据集进行Meta分析，建立STST4*吸烟的交互项，计算交互作用的归因比例，研究STAT4风险等位基因与吸烟之间的乘性和加性交互作用。在复制队列中重新分析具有统计学意义(未调整的p0.05)的结果。

实验结果

1、吸烟与临床表现无显著关系（临床标准指ACR98标准）

2、中性粒细胞胞浆因子2(NCF2)，白细胞介素-12A(IL12A)和STAT4风险等位基因与心肌梗死独立正相关。

其中携带STAT4和IL12A两种风险变异等位基因的患者与携带其他等位基因组合的患者(27%vs7%)相比，心肌梗死的患病率明显更高。

根据吸烟情况分组后（全部人群，吸烟组，不吸烟组），未发现与NCF2或IL12A风险等位基因与MI有显著相关性。

在吸烟者中，STAT4风险等位基因表现出更强的相关性。分析携带STAT4风险等位基因和心肌梗死的关系，发现吸烟者患心肌梗死的风险几乎是不吸烟者的3倍，在携带两个风险等位基因的患者中，吸烟者的风险比吸烟者高8倍以上，在没有风险等位基因的患者中未得到吸烟与MI有关的统计学差异。

3、心肌梗死STAT4基因与吸烟的交互作用导致MI和狼疮肾炎发病率升高。在发现队列和复制队列中，效应值随着STAT4风险等位基因数量的增加而增加，吸烟导致纯合子个体心肌梗死的风险增加8倍以上。

4、既往研究：STAT4与吸烟均与APL发生有关。对吸烟组进行分析：多元回归模型（STAT4风险等位基因、任何aPL、肾炎、随访时的年龄和疾病持续时间作为协变量）显示STAT4风险等位基因与MI之间的相关性仍然显著。剔除狼疮肾炎的因素后，STAT4等位基因与心肌梗死的相关性仍然显著

5、在健康对照人群中检测IL-12诱导的CD8+T细胞中p-STAT4水平，发现吸烟者p-STAT4水平高于非吸烟者。

6、既往研究：狼疮肾炎患者发生MI风险高于非狼疮肾炎患者，推测吸烟并非直接影响狼疮患者发生MI，而是通过吸烟与STAT4交互作用的结果。而在调整肾炎模型或将肾炎患者剔除时，STAT4风险等位基因/吸烟对心肌梗死的影响并没有减少。

备注：狼疮肾炎诊断标准：持续蛋白尿＞0.5g/day，＞3+，或细胞管型（红细胞、血红蛋白、颗粒管型或混合管型）

补充：

判断一个基因与某一特定疾病之间是否存在相关性的常用办法是利用存在于人类整个基因组的单核苷酸多态性（single-nucleotidepolymorphisms,SNPs），进行全基因组关联分析（genome-wideassociationstudies,GWASs)。

单核苷酸多态性（single-nucleotidepolymorphisms,SNPs）主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种，占所有已知多态性的80%以上。

全基因组关联分析（Genome-wideassociationstudy,GWASs）是指在人类全基因组范围内找出存在的序列变异，即单核苷酸多态性（SNPs），进行全基因组水平上的对照分析或相关性分析，从中筛选出与疾病相关的SNPs。

如果一个SNP与一个基因位置靠近或者位于该基因内，而该基因上的某个SNP突变可能造成疾病，这个SNP与该致病突变将在人群中紧密连锁。那么便可以在几千或者更多患者中提取DNA，并将这些DNA与大约相等数量的健康人群（最好是患者的健康亲属或同种族和地理分布相同的群体）中提取的DNA样品进行对比，判断辨别与疾病联结最为紧密的SNPs。